-
磁性活化細胞分選法（MACS）
發(fā)布時間： 2021-11-15 點擊次數(shù)： 1439次材料與儀器
緩沖液
磁性細胞分離器 分離柱適配器 陽性選擇柱 符合收集容積的收集器 磁性微珠步驟
一、標(biāo)記
1. 標(biāo)準(zhǔn)方法分離外周血單核細胞或經(jīng)酶消化法及其他方法制備的細胞懸液。
2. 用 Ficoll-Paque 去除死細胞。
3. 用 30 μm 尼龍網(wǎng)篩或濾膜（Myltenyi，# 414: 07）過濾細胞去除細胞團塊 （濾膜應(yīng)用前用緩沖液濕潤）。
4. 緩沖液（D-PBS，pH 7.2 ，含 0.5 % BSA 和 2 mmol/L EDTA）洗滌細胞，離心。
5. 重新懸浮離心細胞，每 107 個細胞懸浮于 80 μl 緩沖液（80 μl 為最少*，即使總細胞數(shù)低于 107 個）。
6. 按每 107 個細胞加微珠標(biāo)記液 20 μl。
7. 混勻，6~12℃ 孵育 15 min (對于更少的細胞，用同樣體積的微珠標(biāo)記液）。
8. 加入 10~20 倍于標(biāo)記液體積的緩沖液稀釋細胞。
9. 300 g 離心 10 min。
10. 去上清，按每 108 個細胞加緩沖液 500 μl 重新懸浮結(jié)合了微珠的細胞。
二、陽性磁性分離
11. 將分離柱放入 MACS 分離器（MiniMACS、MidiMACS、VarioMMMACS，或 SuperMACS（Miltenyi））的磁性區(qū)。
12. 洗柱：MS＋/ RS＋ 500 μl； LS＋/ VS＋ 3 ml。
13. 將細胞懸液加人分離柱中：MS＋/ RS＋ 500~1000 μl； LS＋/ VS＋ 1~10 ml。
14. 讓陰性細胞流過分離柱。
15. 用緩沖液淋洗柱子： MS＋/ RS＋ 3×500 μl； LS＋/ VS＋ 3×3 ml。
16. 將分離柱從分離器中取出放置在收集管上。
17. 用吸管加適量緩沖液于柱中（MS＋/ RS＋ 1 ml； LS＋/ VS＋ 5 ml），推動針管式活塞洗脫陽性標(biāo)記細胞。
18. 細胞計數(shù)，用生長培養(yǎng)基調(diào)整濃度。
(a)原代培養(yǎng)調(diào)整為1×105~1×106 /ml，接種于培養(yǎng)瓶中；
(b)克隆培養(yǎng)調(diào)整為 10~1000 /ml，接種于培養(yǎng)皿。
-
血清系列
-
細胞轉(zhuǎn)染
-
支原體清除
-
細胞凍存
-
實驗耗材
-
分子試劑
-
細胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養(yǎng)基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO（東洋紡）
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner（格瑞納）
-
IKA（艾卡）
-
化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測
-
細胞生物學(xué)
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細胞類-實驗耗材
-
原代細胞
-
植物檢測系列試劑盒
-
SERANA
-
細胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）
-
類器官培養(yǎng)
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質(zhì)
-
細胞因子分子
-
生物樣本庫
